――達(dá)科為ELISA超敏試劑盒
       酪胺信號(hào)放大技術(shù)（tyramide signal amplification,TSA）是上世紀(jì)90年代在傳統(tǒng)酶促放大理論基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)一種新的信號(hào)放大技術(shù)。其基本原理如下：在過(guò)氧化氫存在時(shí)，一些酶如辣根過(guò)氧化物酶，堿性磷酸酶等可以催化一種酪胺的底物為一種非?；钴S的短壽命中間體；在短時(shí)間內(nèi)，中間體可以共價(jià)結(jié)合到周圍蛋白的富電子表面形成酪胺化復(fù)合物，大量富集成以酶為中心的類似“島”或者“樹”狀的聚集團(tuán)（如圖）；可以在酪胺上標(biāo)記熒光或者其它標(biāo)記物如生物素用于檢測(cè)。

      酪胺信號(hào)放大技術(shù)不是檢測(cè)技術(shù)，只是放大系統(tǒng)，它可以提高ELISA、IHC和ISH等的靈敏度10-100倍。另外，TSA作為擴(kuò)大信號(hào)其理論本身不會(huì)增加非特異性信號(hào)，而不是像原位PCR那樣擴(kuò)增檢測(cè)目標(biāo)，所以不會(huì)造成檢測(cè)偏差和假陽(yáng)性。
      但是，若靶標(biāo)本底生物素水平較高或者抗體交叉反應(yīng)比較高，同樣實(shí)驗(yàn)背景會(huì)成倍地放大。TSA導(dǎo)致新問(wèn)題需要采用產(chǎn)生更低背景的實(shí)驗(yàn)材料或方法，來(lái)降低檢測(cè)技術(shù)的非特異性背景，為TSA放大系統(tǒng)提供足夠的空間。如在分子雜交中使用DNP標(biāo)記的TSA Plus，由于DNP是生物體內(nèi)罕見的分子，檢測(cè)背景很低，性噪比就高。
      TSA應(yīng)用范圍廣泛，ELISA, **組化（IHC），原位雜交（ISH），芯片檢測(cè)和其它任何使用HRP或AP的檢測(cè)方法中都可以應(yīng)用，它的放大效應(yīng)可以使ELISA雙抗體夾心法檢測(cè)樣品濃度從皮克級(jí)（10－12）別提高到飛克級(jí)別（10－15）。
      TSA應(yīng)用在傳統(tǒng)ELISA上開發(fā)出超敏ELISA，這使檢測(cè)人體內(nèi)飛克級(jí)別的細(xì)胞因子成為可能，有利地促進(jìn)科學(xué)深入研究人體內(nèi)微量蛋白的作用。超敏ELISA還可以間接節(jié)省客戶研究所用的寶貴樣品，客戶在有限的樣本中檢測(cè)更多蛋白指標(biāo)。
     基于TSA技術(shù)開發(fā)的ELISA超敏試劑盒，其TSA放大步驟如下:
     1.在傳統(tǒng)ELISA基礎(chǔ)上，HRP結(jié)合到微孔板后，再加入放大物質(zhì)A（ biotinyl-tyramide ,B-T）到孔內(nèi)，孵育20分鐘。
     2.洗滌4次。
     3.加入streptavidin-HRP(SA-HRP)，結(jié)合 B-T。孵育20min。
     4.洗滌4次。
     5.加入TMB顯色10-15分鐘，中止反應(yīng)，在450nm波長(zhǎng)讀數(shù)。
     以人IL-6 ELISA產(chǎn)品為例，超敏試劑盒與普通試劑盒實(shí)驗(yàn)對(duì)比圖表如下：

 放大倍數(shù)50       酶： HRP         顯色底物：TMB          檢測(cè)波長(zhǎng)：450nm

檢測(cè)范圍:4 - 0.125 pg/ml
靈敏度:0.04pg/ml

 人IL-6 ELISA超敏試劑盒同類產(chǎn)品比較如下：

      人IL-6 ELISA超敏試劑盒性能對(duì)比分析發(fā)現(xiàn)，DKW公司與另外四家公司超敏試劑盒在規(guī)格、檢測(cè)范圍、靈敏度和變異系數(shù)方面沒(méi)有顯著差別；在實(shí)驗(yàn)操作的孵育時(shí)間上，DKW公司超敏試劑盒的孵育時(shí)間只有120分鐘，遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于其它四家公司的孵育時(shí)間。